การศึกษาการเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ขั้นปลายของของเหลวที่เก็บเกี่ยวตัวอ่อนไก่สำหรับไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิดที่ 4 (ตอนที่ 1)
Sep 16, 2026| ไข้หวัดใหญ่ (หรือเรียกอีกอย่างว่าไข้หวัดใหญ่) เป็นโรคติดเชื้อทางเดินหายใจที่ติดต่อได้ง่าย ซึ่งสามารถก่อให้เกิดโรคทางเดินหายใจได้หลายประเภท ตามข้อมูลที่เชื่อถือได้จากองค์การอนามัยโลก (WHO) ประมาณหนึ่งพันล้านคนถูกคุกคามจากไวรัสไข้หวัดใหญ่ในแต่ละปี ไวรัสไข้หวัดใหญ่ (IV) อยู่ในวงศ์ Orthomyxoviridae และเป็นไวรัส RNA สัมผัสเชิงลบ-สายเดี่ยว อนุภาคไวรัสไข้หวัดใหญ่มีลักษณะเป็นทรงกลม มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 80-120 นาโนเมตร และโครงสร้างของอนุภาคสามารถแบ่งออกเป็น 3 ชั้นจากภายนอกเข้าไป ได้แก่ เปลือก โปรตีนเมทริกซ์ และแกนกลาง
โครงสร้างของไวรัสไข้หวัดใหญ่ A และ B
ยาต้านไวรัสและการฉีดวัคซีนป้องกันไข้หวัดใหญ่โดยตรงเป็นขั้นตอนสำคัญในการรักษาและป้องกันโรคไข้หวัดใหญ่ในปัจจุบัน ในปัจจุบัน วิธีที่ใช้กันทั่วไปในการวิจัยวัคซีนไข้หวัดใหญ่คือเมทริกซ์เอ็มบริโอและเซลล์เมทริกซ์ โดยเอ็มบริโอไก่เป็นตัวเลือกที่ใช้บ่อยที่สุดในการเตรียมของเหลวสำหรับไวรัสไข้หวัดใหญ่โดยนักวิจัยทั้งในและต่างประเทศ ของเหลวไวรัสอัลลันโทอิกของเอ็มบริโอไก่มีสิ่งเจือปนมากมาย เช่น โอวัลบูมินและโปรตีนโครงสร้างของไวรัส โอวัลบูมินเป็นส่วนประกอบสำคัญที่สามารถทำให้เกิดอาการแพ้ในวัคซีน-บุคคลที่รับวัคซีน ดังนั้นการทำให้ชัดเจน ความเข้มข้น และการทำให้บริสุทธิ์ของของเหลวไวรัสอัลลันโทอิกของตัวอ่อนไก่จึงเป็นขั้นตอนสำคัญในการพัฒนาวัคซีนไวรัสไข้หวัดใหญ่
ปัจจุบันเทคโนโลยีการทำให้ชัดเจนของของเหลวในการเก็บเกี่ยวไวรัสที่ใช้กันทั่วไปคือการปั่นแยก + การกรองแบบลึก วิธีการหลักในการทำให้เชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่บริสุทธิ์ ได้แก่ การกรองแบบอัลตราฟิลเตรชัน การปั่นแยกด้วยความเข้มข้นสูงเป็นพิเศษ โครมาโตกราฟีแบบกรองเจล และโครมาโตกราฟีแบบรวม
การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบลักษณะการติดเชื้อของไวรัสไข้หวัดใหญ่ 4 ชนิด-H1N1, H3N2, BV และ BY- ในเอ็มบริโอไก่อายุ 9-11 วัน ของเหลวอัลลันโทอิกของไวรัสชนิดโมโนวาเลนต์ได้มาจากการเพาะเลี้ยงตัวอ่อนไก่เพื่อเป็นวัสดุพื้นฐานสำหรับการประมวลผลของไวรัสขั้นปลายน้ำ ในระหว่างการศึกษา มีการเปรียบเทียบวิธีการทำให้กระจ่าง ความเข้มข้น และการทำให้บริสุทธิ์ที่แตกต่างกัน เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการแยกโปรตีนเป้าหมายจากส่วนประกอบอื่นๆ (เช่น โปรตีนเบ็ดเตล็ดและโอวัลบูมิน)
แผนงานเทคโนโลยีการทดลอง
เพาะเลี้ยงตัวอ่อนไก่ที่อุณหภูมิ 37 องศา เป็นเวลา 9-11 วัน จากนั้นพวกเขาได้รับการฉีดวัคซีนด้วยไวรัสไข้หวัดใหญ่ A (A1 สำหรับ H1N1, A3 สำหรับ H3N2) ที่ MOI 1:10,000 และไวรัสไข้หวัดใหญ่ B (B1 สำหรับ BV, B2 สำหรับ BY) ที่ MOI 1:10,000 เพาะเลี้ยงไวรัส H1N1 และ H3N2 ที่อุณหภูมิ 33-34 องศา เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ในขณะที่เพาะเลี้ยงไวรัส BV และ BY ที่อุณหภูมิ 33 องศา เป็นเวลา 7.2 ชั่วโมง จากนั้นนำเอ็มบริโอไปแช่เย็น และเก็บของเหลวอัลลันโทอิก ของเหลวอัลลันโทอิกมีปริมาณโปรตีนรวมสูง มีความหนืดสูง และดูขุ่น ทำให้อธิบายได้ยาก
ผลของกระบวนการทำให้กระจ่างต่างๆ ต่อคุณภาพของน้ำเก็บเกี่ยวไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิดที่ 4
การชี้แจงเป็นขั้นตอนสำคัญในกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ โดยทำหน้าที่เป็นการบำบัดเบื้องต้นสำหรับสิ่งเจือปนที่ไม่ละลายน้ำจำนวนมาก ขั้นตอนนี้ใช้ของไหลอัลลันโทอิกเป็นวัตถุดิบ หลังจากการปั่นแยกด้วยความเร็วสูง-อย่างต่อเนื่อง ของเหลวจะถูกทำให้ใสและกรองผ่านตลับกรองที่มีขนาดรูพรุน 3μm และ 0.8+0.45μm และ 3μm และ 0.8+0.65μm มีการตรวจสอบผลกระทบของขนาดตลับกรองทั้งสองที่มีต่อกระบวนการทำให้กระจ่างและผลลัพธ์ และเลือกรูปแบบการชี้แจงที่เหมาะสมเพื่อกำหนดกระบวนการทำให้กระจ่างที่เหมาะสมที่สุด
ผลลัพธ์ของการทดสอบของเหลวที่ทำให้กระจ่างสำหรับไวรัสไข้หวัดใหญ่ทั้งสี่ประเภทแสดงอยู่ในรูปที่ 1-3 . CA1-1 แสดงถึงผลลัพธ์ของของเหลวที่ทำให้กระจ่างที่ทดสอบโดยใช้ตลับกรอง 3μm และ 0.8+0.65μm, CA1-2 แสดงถึงผลลัพธ์ของของเหลวที่ทำให้กระจ่างที่ทดสอบโดยใช้ตลับกรอง 3μm และ 0.8+0.45μm และส่วนที่เหลือจะคล้ายกัน
รูปที่ 1 ผลการตรวจหาไวรัสไข้หวัดใหญ่ที่มีความเข้มข้น - ปริมาณโปรตีนทั้งหมด
รูปที่ 2 ผลการตรวจหาไวรัสไข้หวัดใหญ่ที่ให้ความกระจ่าง - ไทเทอร์ hemagglutination
รูปที่ 3 ผลการตรวจหาสารละลายที่ทำให้ไวรัสไข้หวัดใหญ่ - อัตราการกำจัดโปรตีนทั้งหมด
ผลการวิจัยพบว่าถึงแม้จะมีความแตกต่างเชิงตัวเลขในปริมาณโปรตีนทั้งหมดและอัตราการกำจัดโปรตีนทั้งหมดระหว่างกลุ่ม แต่ก็ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ อาจเป็นเพราะขนาดรูพรุนของตลับกรองมีขนาดเล็กเกินไป และทั้งหมดสามารถตอบสนองข้อกำหนดในการชี้แจงได้ ในส่วนของไทเทอร์การแข็งตัวของเลือด ตลับกรอง 3μm และ 0.8+0.45μm แสดงไทเทอร์การแข็งตัวของเลือดที่สูงกว่า ดังนั้น จึงเลือกขนาดรูพรุนที่เล็กกว่าของตลับกรอง 3μm และ 0.8+0.45μm เพื่อการชี้แจงที่เหมาะสมที่สุด
อ้างอิง: Huang, Zhentian การเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการผลิตขั้นปลายสำหรับวัคซีนแยกเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่สี่ชนิด [D] มหาวิทยาลัยเกษตรเสิ่นหยาง 2024 DOI:10.27327/d.cnki.gshnu.2024.001595